Papel de peptideos bioativos da laminina na atividade dos invadopodios em linhagem celular derivada de carcinoma adenoide cistico

Resumo

Nosso laboratório estuda o papel da laminina no comportamento biológico de tumores de glândula salivar. Já foi demonstrado que a laminina-111 regula o fenótipo de células derivadas do carcinoma adenóide cístico (células CAC2), e que seus peptídeos bioativos AG73 e C16 são capazes de regular migração, invasão e secreção de proteases nessas células. Os processos de invasão e metástase de tumores malignos envolvem etapas, como migração e secreção de proteases. A atividade de degradação celular vem sendo relacionada aos invadopódios, especializações de membrana "finger-like", ricas em actina, cortactina e MT1-MMP. Estudos realizados em nosso Laboratório já caracterizaram os invadopódios nas células CAC2. Nesse projeto avaliaremos o papel dos peptídeos bioativos AG73 e C16 na atividade dos invadopódios nessas células. Para este estudo utilizaremos ensaio de degradação de gelatina fluorescente, complementado por imunofluorescência. Células tratadas com os peptideos serão plaqueadas sobre substrato fluorescente. Como controle, células serão crescidas na presença de peptídeos "scrambled". Imunofluorescência para actina e MT1-MMP será realizada para detecção dos invadopódios. As áreas de digestão enzimática, estimuladas por C16 e AG73, aparecerão como espaços escuros na matriz fluorescente verde. Essas áreas serão analisadas e medidas. Também estudaremos o papel de receptores do tipo integrinas e sindecan-1 na indução de formação de invadopódios pelos peptídeos. Para isso será utilizado RNA de interferência. Células silenciadas e tratadas com os peptídeos serão submetidas a ensaios de degradação de gelatina fluorescente. (AU)