Monitoramento de cianobactérias e cianotoxinas em dois reservatórios subtropicais por PCR quantitativo em tempo real

Resumo

As cianobactérias são conhecidamente produtoras de cianotoxinas e a ocorrência de florações potencialmente tóxicas em reservatórios de abastecimento público tem sido cada vez mais frequente devido ao processo de eutrofização. Dentre as cianotoxinas produzidas pelas cianobactérias destacam-se a microcistina e saxitoxina. Esses metabólitos são biossintetizados por dois grupos de genes conhecidos como mcy e sxt, respectivamente. A detecção desses genes a partir de PCR quantitativo em tempo real (qPCR) permite a distinção das cepas tóxicas e não tóxicas, impossíveis de diferenciação apenas pela morfologia. Desse modo, o objetivo deste projeto é investigar a ocorrência de cianobactérias potencialmente produtoras de cianotoxinas em dois reservatórios subtropicais, Lobo e Itupararanga, via amplificação dos genes RNAr 16S, mcyA e sxtA por qPCR. Foram realizadas quatro amostragens durante um ano na cabeceira e barragem de ambos os reservatórios, em duas profundidades (superfície e limite inferior da zona fótica). Após a extração do DNA total e verificação de sua integridade e concentração, as reações de amplificação dos genes alvos serão realizadas com a utilização de iniciadores específicos. As curvas padrão serão estabelecidas relacionando as concentrações dos fragmentos alvos com o ciclo limiar (o número do ciclo de PCR em que a fluorescência passa um nível limiar estabelecido) para os três genes analisados. Com a finalização da análise de qPCR, os resultados obtidos serão relacionados a variáveis biológicas e físico-químicas da água como a abundância de cianobactérias, concentração de cianotoxinas, temperatura da água e razão NT:PT para compreender a dinâmica de ocorrência de cianobactérias e cianotoxinas nos dois ambientes estudados. (AU)