Avaliação da ação da triiodotironina (T3) no sistema purinérgico, com participação de vias extranucleares, em tecido adiposo humano

Resumo

O Tecido Adiposo Branco (TAB) e um importante órgão endócrino, fundamental para regulação metabolica do organismo, por meio da produção e secreção adipocinas, como a adiponectina e leptina. Sabe-se que o TAB expressa receptores do sistema purinérgico, que sao importantes no metabolismo lipidico, e podem ser ativados por adenosina trifosfato (ATP) e seus derivados. Alem disso, o TAB e modulado por hormonios tiroideanos (HT), principalmente a triiodotironina (T3), por meio de vias extranucleares, dentre elas MAPK/ERK e PI3K/Akt. Existe importante relação entre o HT e a sinalização purinérgica em diferentes sistemas fisiológicos e patológicos, contudo e pouco elucidada na literatura essa relação no tecido adiposo. Em resultados previos, identificamos a expressão dos receptores purinérgicos em adipocitos subcutâneos humanos, dados de transcriptoma global, o que determinou a escolha dos receptores P2X7, P2Y1 e P2Y11, a serem investigados no presente estudo. Com isso, objetiva-se validar a partir de resultados da ação do T3 sobre a expressão dos receptores P2X7, P2Y1 e P2Y11, bem como determinar se essa ação e mediada via mecanismos não canônicos, por vias MAPK/ERK e PI3K, e se há a translocação desses receptores que estão localizados na membrana celular, além de mensurar a liberação de adipocinas. Para isso pré-adipócitos humanos (HPAd-S802s-05A), após a diferenciação, serão submetidas ao tratamento com T3 (10nM), por 24h, na presença ou ausência dos inibidores das vias MAPK/ERK (PD98059 - 50uM) e PI3K (LY294002 - 50 ¼M). Os seguintes parâmetros serão analisados: viabilidade celular (MTT), confirmação da inibição das vias (western blot), determinação de acúmulo lipídico (coloração Oil Red), lipolise basal (ensaio NEFA e glicerol), estresse oxidativo (dosagens de malonaldeido e carbonilação), expressão proteica dos receptores purinérgicos P2 e adipocinas (imunofluorescência e western blot), translocação dos receptores P2 (imunofluorescência), quantificação do ATP extracelular (ensaio de bioluminescência luciferina-luciferase HS II), quantificação das NTPDAses (imunofluorescência). O presente trabalho permitirá determinar, se a ação do T3 na modulação dos receptores purineérgicos P2, envolve a ativação de vias não nucleares, e qual o reflexo da ação do hormônio e da inibição das vias, na liberação de ATP extracelular, no tecido adiposo subcutâneo humano. A compreensão desse envolvimento, do T3 sobre componentes da sinalização purinérgica, pode nos levar a identificar efeitos observados em distúrbios, como na Obesidade. (AU)