O papel do estrógeno na modulação de miRNAs na próstata de ratos submetidos a RPM: avaliação e estudos funcionais em células prostáticas

Resumo

A abordagem DOHaD (Origem Desenvolvimentista Da Saúde e da Doença) busca estabelecer a correlação entre a incidência de doenças na vida adulta e no envelhecimento perante os eventos sofridos durante o início do desenvolvimento. Um de seus modelos mais utilizados para estudos de DOHaD é a submissão de roedores a restrição proteica materna (RPM). Estudos experimentais já demonstram que ela é responsável por inibir o desenvolvimento da próstata e aumentar a incidência de Câncer de Próstata (CaP) com o envelhecimento. Uma das principais consequências desses eventos são as alterações epigenéticas que acompanham a prole ao longo da vida, como RNAs não codificantes e os microRNAs. Recentemente, nosso grupo de pesquisa vem estudando de forma global os mecanismos moleculares e epigenéticos alterados na próstata de animais submetidos à RPM. Assim, o objetivo deste trabalho será analisar o papel do estrógeno na modulação da expressão dos miR33-5p e miR-184 (previamente selecionados a partir de análises de bioinformática) na próstata ventral (PV) de animais no dia pós-natal (DPN) 21 que foram submetidos à RPM. Para isso, iremos utilizar dados do sequenciamento de miRNAs (GSE180673) e mRNAs (GSE180674) da PV de ratos Sprague Dawley, que foram divididos em dois grupos experimentais: grupo CTR (controle, com dieta a 17% de proteína, n=6) e GLLP (restrição proteica na gestação e lactação, dieta a 6%, n=6), e que foram eutanasiados no DPN 21. Esses dados fazem parte do banco de dados do nosso grupo de pesquisa (gerados no processo FAPESP 2017/01063-7). A partir dos dados de sequenciamento de miRNA identificamos os alvos diferencialmente expressos (DE), realizamos predição de alvos, comparamos aos dados de sequenciamento de mRNAs da PV desses animais e selecionamos miRNAs para serem validados. As validações acontecerão por meio de RTq-PCR na PV dos animais. Além disso, também iremos realizar ensaios funcionais em células prostáticas benignas e tumorais (PNT2 e PC3) cronicamente expostas ao estrógeno, bem como ensaios de viabilidade e migração celular. Com esse trabalho, esperamos identificar o papel do na modulação de miRNAs na PV dos animais submetidos a RPM e seu papel funcional para células prostáticas.