O papel da autofagia hepática na neoglicogênese e cetogênese durante o estresse térmico agudo

Resumo

A autofagia é um dos principais processos de degradação de componentes intracelulares, como os lipídios (lipofagia) e é essencial para a manutenção da homeostase celular. No fígado, a desregulação do processo autofágico leva ao acúmulo de triglicerídeos e ao desenvolvimento de esteatose. Apesar da sua importância, o papel da autofagia no metabolismo hepático ainda é pouco compreendido. O estresse agudo pelo frio é um modelo fisiológico de ativação da autofagia, onde também encontramos alto fluxo da gliconeogênese e da cetogênese. Usando como modelo o frio agudo e camundongos com fígado deficiente em autofagia, nosso objetivo foi investigar o papel da autofagia no controle da gliconeogênese e da cetogênese. Em nossa hipótese, a ausência de autofagia no fígado, durante o estresse pelo frio, leva à redução do fluxo de gliconeogênese e cetogênese, bem como a um maior acúmulo de gordura no fígado através da redução da lipofagia. Para isso, primeiro geraremos camundongos hepáticos deficientes em autofagia cruzando camundongos Albumina-CRE e Atg7 flox/flox gerando nocaute Atg7 específico de hepatócitos (Alb-Atg7-/-), no background C57Bl/6J. Após, analisaremos o metabolismo da glicose e dos corpos cetônicos em fígado tipo selvagem e Alb-Atg7-/- durante 6 horas de exposição ao frio (4ºC), bem como avaliaremos o fluxo in vivo da piruvato carboxilase e da citrato sintase utilizando método PINTA - não realizado por nenhum grupo brasileiro. Após esse período, os camundongos serão eutanasiados e o fígado colhido para investigação das expressões gênicas e proteínas envolvidas na gliconeogênese e cetogênese utilizando RT-pPCR e western blot. Além disso, será avaliado o conteúdo lipídico hepático, bem como a expressão gênica e de proteínas envolvidas na síntese e degradação de lipídios.