Estudo da biologia de sistemas integrativa (transcriptômica, proteômica e metabolômica) de placentas de ratas Wistar prenhes portadoras do tumor de Walker 256. Avaliação dos efeitos do crescimento tumoral e da exposição ao tratamento quimioterápico...

Resumo

O câncer durante a gestação representa um grande desafio terapêutico, uma vez que, a saúde materna e fetal/neonatal precisam ser consideradas. As mulheres diagnosticas com câncer durante a gestação podem apresentar alterações na placenta, principal órgão responsável por garantir o sucesso da gestação e a saúde fetal. Estudos encontrados na literatura combinando os termos "placenta", "proteômica' e "câncer", apresentaram carência de resultados. Desta forma, a aplicação da proteômica pode contribuir para o mapeamento de vias proteicas potencialmente alteradas na placenta, em razão do câncer e/ou tratamento oncológico, sobretudo a quimioterapia, possibilitando, portanto, uma busca por novas estratégias terapêuticas que possam ser benéficas para mãe e feto. Experimentos pré-clínicos com o uso de modelos animais vem se mostrando necessários, pois permitem uma maior manipulação/intervenção e controle de variáveis. Nesse sentido, o carcinossarcoma de Walker 256 é um modelo tumoral amplamente utilizado na pesquisa. Desta forma, o objetivo deste trabalho será identificar e comparar alterações no perfil proteômico de placentas de ratas prenhes portadoras do carcinossarcoma de Walker 256, tratadas ou não com os quimioterápicos Doxorrubicina e Ciclofosfamida. Para isso, ratas Wistar prenhes serão distribuídas em quatro grupos experimentais: Controle/Saudáveis (C); Tumor de Walker 256 (W); Tratamento quimioterápico (Q); Tumor de Walker 256 e Tratamento quimioterápico (WQ). No segundo dia, após a identificação da prenhez, será inoculado o tumor de Walker 256 no flanco direito das ratas. Em relação aos quimioterápicos, os mesmos serão administrados via intraperitoneal no décimo quarto e décimo sétimo dia de prenhez, sendo as doses 0,1 mg/Kg de Doxorrubicina e 1 mg/Kg de Ciclofosfamida. A eutanásia ocorrerá no vigésimo dia de prenhez, ou seja, um dia antes da data do parto, considerando que o curso da gestação usual desses animais dura em média cerca de 21 dias. Em seguida, as placentas serão pesadas, coletadas (considerando os sexos de forma independente) e armazenadas a -80º C para as análises proteômicas. Tais análises serão realizadas por meio da utilização de um nano UPLC bidimensional (2D-RP/RP) em um Acquity UPLC M-Class System (Waters Corporation, MA, EUA), o qual é conectado em linha a um espectrômetro de massa Synapt G2-Si (Waters Corporation). O espectrômetro de massa executa Aquisições Independentes de Dados, empregando especificamente Espectrometria de Massa Independente de Dados de Ultradefinição (UDMSE). Os dados obtidos através da análise proteômica serão comparados entre os quatro grupos experimentais, a fim de identificar alterações na expressão proteica, buscando mapear possíveis mecanismos de regulação aumentada ou diminuída, ou ainda, proteínas encontradas exclusivamente em algum dos grupos. As identificações proteicas serão baseadas na detecção de mais de dois íons fragmentados por peptídeo, e no mínimo dois peptídeos por proteína, sendo apenas proteínas moduladas com p ¿ 0,05 consideradas significativas. Após a identificação das proteínas por LC-MS/MS, será utilizado o software Progenesis para a análise quantitativa label free, utilizando a intensidade de abundância relativa integrada considerando todos os peptídeos identificados para normalização. Já para a análise de interação de proteínas será utilizado Cytoscape e STRING. E, para as análises de enriquecimento de vias, serão utilizados Gene Ontology, DAVID, Reactome e KEEG como banco de dados.