Mapeamento dos dominios da cauda globular da miosina-va envolvidos no direcionamento a sitios subcelulares especificos.

Resumo

O projeto proposto visa dar continuidade aos nossos estudos anteriores da expressão de diferentes domínios da miosina-Va e Vb em melanócitos em cultura, visando uma descrição sistemática dos fenótipos observados relacionados com a localização subcelular dos domínios transfectados. Estes estudos compreendem análise quantitativa e experimentos adicionais necessários a finalização de dois manuscritos e também experimentos visando o mapeamento dos subdomínios da cauda globular da miosina-Va envolvidos no direcionamento a sítios subcelulares específicos, notadamente o centrossomo e o núcleo. Neste último caso, a abordagem empregada será a transfecção de células de melanoma B16 (linhagem tipo-selvagem para a miosina-Va) com construções plasmidiais codificando diversos subdomínios da cauda globular desta miosina em fusão com a proteína fluorescente verde (GFP), seguida de análise da expressão da proteína recombinante, de sua distribuição subcelular e do fenótipo das células transfectadas. Além disso, propõe-se caracterizar a localização e os efeitos da expressão estável do domínio cauda globular da miosina-Va em células PC12. (AU)