Determinação dos sítios de fosforilação na cauda da molécula de BM-V

Resumo

A miosina da classe V isolada de cérebro de vertebrados, é uma miosina não convencional que possui três domínios: O domínio cabeça ou motor que corresponde a região N-terminal da molécula e contém sítios de ligação à actina e ao ATP. O domínio pescoço que contém 6 repetições do motivo estrutural IQ que servem como sítios de ligação para cadeias leves e calmodulina, proteínas regulatórias do tipo "E-F hand". E o domínio cauda que é a região menos conservada da molécula; sua maior parte é globular com intercalações de porções em alfa-hélice dupla possuindo uma cadeia leve característica de dineínas. Várias propriedades bioquímicas dos domínios cabeça e pescoço já foram elucidadas como: atividades ATPásicas, ligação com a F-actina, regulação pelo Cálcio, entre outras. Quanto ao seu domínio cauda suas funções ainda não foram bem esclarecidas. Estudos anteriores demonstraram que essa região pode ser clivada por uma cisteína protease, denominada calpaína, gerando um fragmento de 80 k Da, que é fosforilada pela proteína quinase II dependente de Ca+2 calmodulina (CaMK-II). O presente projeto propõe identificar o(s) sítio(s), no domínio cauda de BM-V, fosforilado(s) pela CaMK-II, visando sua caracterização como um fator na regulação das funções do domínio cauda. Se conseguirmos determinar o(s) sítio(s) de fosforilação poderemos gerar anticorpos específicos para esta sequência e começar a elucidar algumas das funções desse domínio pouco conhecidas. (AU)